Die Beschaffenheit einer Giftprobe bemisst sich ebenso danach, was nicht in sie gelangt ist, wie danach, was in ihr enthalten ist. Ein Fremdstoff, der im Moment der Gewinnung hineingerät, kehrt Monate später bei einer Messung als zusätzlicher Peak, als unerwartete Bande oder als unerklärliche Abweichung zurück. Dieser Beitrag behandelt nicht die Schritte der Giftgewinnung, sondern die Reinlichkeitsordnung, die um diesen Vorgang herum aufgebaut wird; das Verfahren selbst wurde im Beitrag zur Giftgewinnung beschrieben.
Woher kommt die Kontamination?
Kontamination tritt nicht durch eine einzige Tür ein. Die Quellen vorab aufzulisten, macht sichtbar, welche Maßnahme welchem Risiko entspricht. Dass das gesammelte Volumen sehr klein ist, erschwert die Sache zusätzlich: In einem Tropfen im Mikroliter-Maßstab macht selbst ein mit bloßem Auge unsichtbarer Rückstand verhältnismäßig einen großen Anteil aus. Dieselbe Verunreinigung hätte in einem im Liter-Maßstab arbeitenden Prozess unbemerkt bleiben können.
| Quelle | Wie gelangt es hinein? | Spätere Auswirkung |
|---|---|---|
| Körperflüssigkeit des Tiers | Bei zu starkem Druck oder durch Verletzung sickert sie um die Nadel herum | Proteinbanden im Profil, die nichts mit dem Gift zu tun haben |
| Verdauungsinhalt | Vom Mundbereich zurückfließendes Material tropft grob in das Gefäß | Irreführend hohe Enzymaktivität |
| Außenfläche und Bodenmaterial | Staub und Partikel auf der Kutikula fallen grob in das Gefäß | Trübung, unlöslicher Rückstand |
| Personal | Kontakt ohne Handschuhe, Sprechen, Haar- und Kleidungsfasern | Mikrobielle Last und Signal aus Keratin |
| Vorherige Probe | Wiederverwendete Spitze, Pipette oder ungespültes Gefäß | Kreuzkontamination, Vermischung zwischen Chargen |
| Material und Wasser | Detergensreste, Wasser minderer Qualität, aus Kunststoff herausgelöste Stoffe | Anstieg der Basislinie, Drift in der Messung |
Die beiden letzten Zeilen dieser Liste werden oft übersehen. Ein Detergensfilm, der in einem gewaschen und gespült wirkenden Gefäß zurückbleibt, kann das Haftverhalten von Proteinen an der Oberfläche verändern. Ebenso verschieben Lösungen, die mit Wasser hoher Leitfähigkeit angesetzt werden, Messergebnisse systematisch.
Aufbau des Arbeitsbereichs
Sauberkeit wird nicht erst nach Beginn des Vorgangs, sondern bei der Vorbereitung des Tisches hergestellt. Wird der Bereich in drei Zonen aufgeteilt, ordnet sich der Arbeitsablauf von selbst: die Zone, in der sich das Tier befindet, die Zone, in der gesammelt wird, und die kalte Zone, in die das gesammelte Gefäß gestellt wird. Die Bewegung zwischen diesen drei Zonen verläuft immer in dieselbe Richtung; ein Rückweg ist der Moment, in dem Kontamination am häufigsten auftritt.
- Oberfläche: Es wird eine porenfreie, abwischbare Arbeitsfläche ohne Schnitte und Kratzer verwendet. Eine zerkratzte Oberfläche lässt sich nicht reinigen.
- Luft: Ein schneller, Staub aufwirbelnder Luftstrom wird nicht auf den Gewinnungspunkt gerichtet; das Öffnen von Türen wird nach der Ablaufreihenfolge geplant.
- Anordnung: Offene Gefäße werden nicht auf einer Linie abgestellt, über die Hände hinwegreichen.
- Beleuchtung: Sie muss ausreichen, damit der Tropfen und eine mögliche Trübung zu erkennen sind, und so maßvoll sein, dass das Tier nicht unnötig gereizt wird.
- Reihenfolge: Die in einer Sitzung zu behandelnden Tiere werden vorab festgelegt; Situationen, in denen während des Vorgangs zum Aufzeichnungsbuch zurückgekehrt werden muss, werden verringert.
Material- und Oberflächenmanagement
Einwegmaterial ist der am einfachsten umzusetzende Teil steriler Arbeit. Werden Gewinnungsspitzen, Gefäße und Handschuhe für jedes Tier gewechselt, entfällt das Risiko der Kreuzkontamination weitgehend. Soll ein Teil wiederverwendet werden, muss vorab bestätigt sein, dass das Reinigungsverfahren zum Material passt und keine Rückstände hinterlässt.
Die Oberflächenreinigung erfolgt in zwei Schritten: zuerst wird sichtbarer Schmutz mechanisch entfernt, danach wird mit einem geeigneten Desinfektionsmittel gewischt. Wird diese Reihenfolge gestört, bleibt das Desinfektionsmittel auf der Schmutzschicht liegen und wirkt nicht. Die Einhaltung der Einwirkzeit des Desinfektionsmittels auf der Oberfläche ist entscheidender als das Produkt selbst.
Auch die Arbeitsgewohnheiten des Personals gehören zu diesem Abschnitt. Wann der Handschuh gewechselt wird, nach der Berührung welcher Oberfläche die Hand erneut geschützt wird und ab welchem Punkt die Arme nicht mehr über offene Gefäße hinweggeführt werden, muss vorab besprochen sein. Werden diese Einzelheiten in einer schriftlichen Anweisung festgehalten, verringern sich die Unterschiede zwischen Sitzungen, die von verschiedenen Personen durchgeführt werden. Dieselbe Anweisung erleichtert es auch einer Person, die neu anfängt, zu verstehen, was sie warum tut.
Auch die Kennzeichnung der Gefäße gehört zur Kontaminationskontrolle. Ein nicht nummeriertes Gefäß wird nicht mehr nachverfolgbar, selbst wenn sein Inhalt richtig ist; wie die Chargenkennung aufgebaut wird, wird im Beitrag zur Rückverfolgbarkeit behandelt. Das Etikett wird beschriftet, bevor das Gefäß in die Kälte kommt, und so, dass es von Feuchtigkeit nicht beeinträchtigt wird.
Bedingungen auf Seiten des Tieres
Ein Sekret von einem Tier, dessen Unterkunft nicht sauber ist, ist trotz aller Sorgfalt am Tisch verunreinigt. Die Reinigung der Behälter, die Häufigkeit des Wechsels des Bodensubstrats und das Entfernen nicht gefressener Beute gelten deshalb als Teil der Vorbereitung der Giftgewinnung. Die Ordnung auf Seiten der Kolonie wird im Beitrag zur Zucht im geschlossenen Kreislauf beschrieben. Auch das Entfernen groben Staubs von der Körperoberfläche des Tieres vor dem Eingriff ist üblich.
Wie zeigt sich Kontamination in der Analyse?
Die meisten Verunreinigungen fallen erst auf, wenn die Probe im Labor eingetroffen ist. Die Anzeichen sind bekannt: Peaks in unerwarteten Bereichen des Chromatogramms, eine ansteigende Basislinie, kräftige Banden auf dem Gel außerhalb des Bereichs, in dem die Giftpeptide liegen, und eine Lösung, die trüb bleibt. Wie diese Zeichen zu lesen sind, wird im Beitrag zum Lesen von Chromatogrammen ausgeführt.
Das Problem ist, dass die Analyse von sich aus nicht sagt, woher ein Signal stammt. Deshalb ist neben der Probe auch die Aufzeichnung wertvoll, unter welchen Bedingungen sie gewonnen wurde. Werden Datum der Gewinnung, verwendetes Material, ausführende Person und gegebenenfalls ungewöhnliche Beobachtungen notiert, lässt sich die Ursache einer später auftretenden Abweichung suchen.
Manche Labore führen deshalb pro Messreihe eine Blindprobe mit: Ohne Probenmaterial wird eine nur mit dem verwendeten Gefäß und dem Lösungsmittel angesetzte Probe durch dieselbe Analyse geschickt. Zeigt die Blindprobe ein Signal, liegt die Ursache nicht beim Tier, sondern im Material.
Eine weitere Seite der Kontaminationskontrolle ist die Reinheitsbewertung selbst. Die in Berichten genannte Reinheitsangabe bedeutet, dass die angewandte Methode keine Fremdstoffe erkennen konnte; nicht jede Methode zeigt jede Verunreinigung mit gleicher Empfindlichkeit. Sauberkeit ist daher kein Thema, das sich nachträglich durch Messung korrigieren ließe, sondern eine Ordnung, die auf der Produktionsseite von Anfang an aufgebaut werden muss.
Umfang und Ergebnisse der an unseren Proben durchgeführten Analysen sind auf der Seite Analyse veröffentlicht. Die Ergebnisse sind chargenspezifisch, und für jede Charge werden die Messungen neu durchgeführt.
